2112月

常用的重组DNA分子导入原核宿主细胞的方法有几种

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经用的重组DNA分子导入原核宿主细胞的办法有几种

次要办法:

〔1〕工厂受体细胞:

(1)农杆状菌转变。

根癌农杆状菌是壤切中要害一种萌芽。,自然的条款双子叶工厂和裸子工厂的传染,大部分的的子叶工厂缺席被传染。农杆状菌进入工厂,Ti质体上的T-DNA将被转变到受体C的DNA上。,它是进入工厂细胞的靶生殖细胞的细胞质。。

(2)受精管胡同:

具重要性靶生殖细胞的细胞质的DNAAquarius水瓶座在受精行为后流入子房,工厂健康有精神的面貌、受精列队行进中受精管胡同的外形,外源DNA导入卵子母细胞的以为,齐头并进一步结合到受体细胞生殖细胞的细胞质组中。,跟随卵子的进化,它们适宜新的转生殖细胞的细胞质个别的。。这种办法是奇纳河儒周光裕在80年代初筹集的。,奇纳河最深受欢迎的转生殖细胞的细胞质抗虫棉是由。这种办法的最大优点是它不依赖于薄纸CUL。,简略技术,不喜欢轻易使完美的药厂。,移交育种操作员轻易优秀的。。

(3)粒子轰击:

这种办法也称为粒子轰击(粒子)。 轰击),快车道粒子注射器技术(快车道) particle 微投射的)或生殖细胞的细胞质枪轰击技术(生殖细胞的细胞质) gun 轰击),这是康奈尔大学校舍生物化学学院的一以为成果。。次要应用于单子叶工厂。。但转变生产力较低。。

生殖细胞的细胞质枪按功率分为促进剂爆轰体系、压服放电和紧缩放出气体原动力的三形容型。根本的是金属颗粒(金颗粒或钨GRA)。,DNA在表面上的吸附,以必然的击毁射入工厂细胞。,小颗粒的强穿透性,所以,不喜欢去除细胞壁和斗篷和E。,到这地步完成不变使不同的行动。。

〔2〕牲口受体细胞的引见:
显微注射器法:显微注射器法(microinjection)是使用管尖极细(至μm)的整形微量注射器针,外源生殖细胞的细胞质经过在原核阶段胚胎切中要害径直注射器,继,重组(重排)可能性经过、用力打(用力打)、完全一样的(duplication)或调换(translocation)等气象而使外源生殖细胞的细胞质嵌入宿主的色彩体内。

〔3〕萌芽受体细胞
生产率办法:用Ca水合氢处置细胞。,细胞成为生理保持健康,吸取SUR切中要害DNA分子。,这些细胞是能经历的细胞。,继将重组表达带菌者DNA融化于缓冲溶液中。,在必然体温下,经历态细胞吸取DNA分子。

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