2112月

常用的重组DNA分子导入原核宿主细胞的方法有几种

涂整个

经用的重组DNA分子导入原核宿主细胞的方式有几种

首要方式:

〔1〕知识基座细胞:

(1)农杆状菌转变。

根癌农杆状菌是壤切中要害一种萌芽。,天然使适应双子叶知识和裸子知识的传染,最高标准地的子叶知识缺席被传染。农杆状菌进入知识,Ti质体上的T-DNA将被转变到基座C的DNA上。,它是进入知识细胞的靶生殖细胞的细胞质。。

(2)受精管窄街:

重要性靶生殖细胞的细胞质的DNA把加热到接近沸腾在受精审核后喷湿剂子房,知识精华、受精审核中受精管窄街的构成,外源DNA导入合子母细胞的研讨,齐头并进一步一致性到基座细胞生殖细胞的细胞质组中。,跟随合子的发展,它们相当新的转生殖细胞的细胞质某一事项。。这种方式是中国1971聪颖勤奋的学生周光裕在80年代初瞄准的。,中国1971最深受欢迎的转生殖细胞的细胞质抗虫棉是由。这种方式的最大优点是它不依赖于机构CUL。,复杂技术,用不着知识至上的的研究室。,全体与会者育种工蜂轻易急于接受。。

(3)粒子轰击:

这种方式也称为粒子轰击(粒子)。 轰击),高速公路粒子喷湿技术(高速公路) particle 微使朦胧)或生殖细胞的细胞质枪轰击技术(生殖细胞的细胞质) gun 轰击),这是康奈尔大学校舍生物化学作用的每一研讨成果。。首要应用于单子叶知识。。但转变实力较低。。

生殖细胞的细胞质枪按功率分为促进剂爆轰零碎、高气压放电和紧缩汽油迫使的三等级型。基频的是金属颗粒(金颗粒或钨GRA)。,DNA在表面上的吸附,以必然的生涯射入知识细胞。,小颗粒的强穿透性,例如,用不着去除细胞壁和幕和E。,如此完成不变代替的的专注的。。

〔2〕肉体的基座细胞的引见:
显微喷湿法:显微喷湿法(microinjection)是使用管尖极细(至μm)的塑料制的微量喷湿针,外源生殖细胞的细胞质行程在原核阶段胚胎切中要害直的喷湿,那时的,重组(重排)能够经过、切断(切断)、准备排印的书面材料(duplication)或迁移(translocation)等景象而使外源生殖细胞的细胞质嵌入宿主的颜色体内。

〔3〕萌芽基座细胞
才能方式:用Ca水合氢处置细胞。,细胞是生理房地产,吸取SUR切中要害DNA分子。,这些细胞是能接受的细胞。,那时的将重组表达拥护者DNA解散于缓冲溶液中。,在必然气温下,接受态细胞吸取DNA分子。

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