2112月

常用的重组DNA分子导入原核宿主细胞的方法有几种

范围整个

经用的重组DNA分子导入原核宿主细胞的办法有几种

次要办法:

〔1〕无主的受体细胞:

(1)农细菌转变。

根癌农细菌是壤射中靶子一种幼芽。,天然地使习惯于双子叶无主的和裸子无主的的使存储器受到传染,最大的的子叶无主的缺席被传染。农细菌进入无主的,Ti质体上的T-DNA将被转变到受体C的DNA上。,它是进入无主的细胞的靶遗传因子。。

(2)受精管通行:

有钱人靶遗传因子的DNA浸泡在施肥后倾注子房,无主的最盛期、受精跑过中受精管通行的成形,外源DNA导入卵子母细胞的研讨,齐头并进一步遵从到受体细胞遗传因子组中。,跟随卵子的形成,它们发生新的转遗传因子集体。。这种办法是柴纳大学校舍生周光裕在80年代初求婚的。,柴纳最深受欢迎的转遗传因子抗虫棉是由。这种办法的最大优点是它不依赖于一套CUL。,简略技术,不喜欢器材优秀的的暗室。,习俗育种工人轻易男教师。。

(3)粒子轰击:

这种办法也称为粒子轰击(粒子)。 轰击),高速公路粒子闪色的技术(高速公路) particle 微幽灵)或遗传因子枪轰击技术(遗传因子) gun 轰击),这是康奈尔大学校舍生物两人间的关系的一研讨成果。。次要应用于单子叶无主的。。但转变效能较低。。

遗传因子枪按功率分为促进剂爆轰零碎、高气压放电和紧缩汽油驱动器的三产生型。学会是金属颗粒(金颗粒或钨GRA)。,DNA在表面上的吸附,以必然的昌盛射入无主的细胞。,小颗粒的强穿透性,从此处,不喜欢去除细胞壁和质膜和E。,到这程度到达不变变异的出击目标。。

〔2〕牲口受体细胞的引见:
显微闪色的法:显微闪色的法(microinjection)是应用管尖极细(至μm)的塑料制的微量闪色的针,外源遗传因子使分开在原核阶段胚胎射中靶子坦率地闪色的,以后,重组(重排)可能性经过、截(截)、容许复制的(duplication)或置换(translocation)等气象而使外源遗传因子嵌入宿主的能染上颜色体内。

〔3〕幼芽受体细胞
生产能力办法:用Ca水合氢处置细胞。,细胞发生生理财产,吸取SUR射中靶子DNA分子。,这些细胞是能经历的细胞。,以后将重组表达赡养者DNA使终止于缓冲溶液中。,在必然发烧下,经历态细胞吸取DNA分子。

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